食品微生物检验室技术操作要求

  ④处理和接种食品标本时，进入无菌 处理和接种食品标本时， 室操作，不得随意出入， 室操作，不得随意出入，如需要传 递物品，可通过小窗传递。 递物品，可通过小窗传递。 ⑤在无菌室内如要安设空调时，则 在无菌室内如要安设空调时， 应有过滤装置。 应有过滤装置。

  微生物检测用的玻璃器皿、 微生物检测用的玻璃器皿、金属 用具及培养基、 用具及培养基、被污染和接种的培养 物等，必须经灭菌后方能使用。 物等，必须经灭菌后方能使用。

  (3) 煮沸消毒 (4)灭菌后处理 (4)灭菌后处理 灭菌后物品， 灭菌后物品，按一般的情况已属 无菌， 无菌，从灭菌器中取出应仔细检查 放置，以免再度污染。 放置，以免再度污染。 取出后的合格灭菌物品，应存 取出后的合格灭菌物品， 放于贮藏室或防尘柜内， 放于贮藏室或防尘柜内，严禁于未 灭菌物品混放。凡属合格物品， 灭菌物品混放。凡属合格物品，应 标有灭菌日期及有效期限。 标有灭菌日期及有效期限。每批灭 菌处理完成后，记录灭菌品名、 菌处理完成后，记录灭菌品名、数 量、温度、时间、操作者。 温度、时间、操作者。

  此法适应于在干热情况下， 此法适应于在干热情况下， 不损坏、不变质、不蒸发的物品， 不损坏、不变质、不蒸发的物品，较常 用于玻璃器皿、金属制作的产品、 用于玻璃器皿、金属制作的产品、陶瓷制品等 的灭菌。 的灭菌。

  ①器械、器皿应清洗后再干烤，以 器械、器皿应清洗后再干烤， 防附着在表面的污物碳化。 防附着在表面的污物碳化。 灭菌时安放物品不能过挤， ②灭菌时安放物品不能过挤，不要 非间接接触底和箱壁， 非间接接触底和箱壁，物品之间留 有空隙。 有空隙。

  手提式高压锅在主体内加入3L ①手提式高压锅在主体内加入3L 清水，立式高压锅加水16L( 16L(重复 清水，立式高压锅加水16L(重复 使用时应将水量补足， 使用时应将水量补足，水变混浊 需更换) 需更换) 。 ②手提式压力锅将顶盖上的排气 管插入消毒桶内壁的方管中( 管插入消毒桶内壁的方管中(无 软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不 得使用) 得使用) 。

  4.从包装中取出吸管时， 4.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及 从包装中取出吸管时 外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时， 外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时， 吸管尖不能触及试管或平皿边。 吸管尖不能触及试管或平皿边。 5.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作， 5.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作， 接种样品 接种细菌或样品时， 接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后 及打开试管塞都要通过火焰消毒。 及打开试管塞都要通过火焰消毒。 6.接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧 6.接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧 灼全部金属丝， 灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与 杆的连接处。 杆的连接处。 7.吸管吸取菌液或样品时， 7.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮 吸管吸取菌液或样品时 头吸取，不得直接用口吸。 头吸取，不得直接用口吸。

  (1)灭菌方法 (1)灭菌方法 是利用不加压力的蒸汽灭菌， 是利用不加压力的蒸汽灭菌，某 些物质经高压蒸汽灭菌容易破坏， 些物质经高压蒸汽灭菌容易破坏，可 用此法灭菌。 用此法灭菌。 (2)血清凝固器使用方法 (2)血清凝固器使用方法 培养基中含有血清或鸡蛋特殊成 分时，因高热会破坏其营养成分， 分时，因高热会破坏其营养成分，故 用低温，可使用血清凝固， 用低温，可使用血清凝固，又可达到 灭菌目的，在使用该法灭菌的血清等 灭菌目的， 分装时，需严格遵守无菌操作，试管、 分装时，需严格遵守无菌操作，试管、 平皿也经灭菌后使用。 平皿也经灭菌后使用。

  无菌室使用前后应将门关紧， ③ 无菌室使用前后应将门关紧，打开紫 外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时， 外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时， 30W紫外灯 距离在1.0m 紫外灯， 1.0m处 需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时 间不少于30min 使用紫外灯， 30min， 间不少于30min，使用紫外灯，应注意 不得直接在紫外线下操作， 不得直接在紫外线下操作，以免引起 损伤， 损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻 轻拭擦，除去上面灰尘和油垢， 轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减 少紫外线穿透的影响。 少紫外线穿透的影响。

  ⑤使用自动程序控制式压力蒸汽 灭菌器，在放好物品关紧门后， 灭菌器，在放好物品关紧门后， 应根据物品类别按动相应开关， 应根据物品类别按动相应开关， 以便按要求程序自动进行灭菌， 以便按要求程序自动进行灭菌， 灭菌时必须利用附设仪表记录 温度与时间以备查， 温度与时间以备查，操作要求 应严格按照厂家说明书进行。 应严格按照厂家说明书进行。

  ① 无菌室通向外面的窗户应为双层玻 并要密封，不得随意打开， 璃，并要密封，不得随意打开，并 设有与无菌间大小相应的缓冲间及 推拉门，另设有小窗， 推拉门，另设有小窗，以备进入无 菌间后传递物品。 菌间后传递物品。 无菌室内应保持清洁， ② 无菌室内应保持清洁，工作后用 2%-3%煤酚皂溶液消毒 煤酚皂溶液消毒， 2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作 台面，不得存放与实验无关的物品。 台面，不得存放与实验无关的物品。

  食品微生物检验室工作人员， 食品微生物检验室工作人员， 必须有严格的无菌观念， 必须有严格的无菌观念，许多试验 要求在无菌条件下进行，根本原因： 要求在无菌条件下进行，主要原因：

  灭菌时将箱门关紧，接上电源， ③灭菌时将箱门关紧，接上电源， 先将排气孔打开约30min 30min， 先将排气孔打开约30min，排除 灭菌器中的冷空气， 灭菌器中的冷空气，温度升至 160℃调节指示灯 维持1.5 2h。 调节指示灯， 1.5～ 160℃调节指示灯，维持1.5～2h。 灭菌完毕后或升温过程中， ④灭菌完毕后或升温过程中，须在 60℃以下才能打开箱门 以下才能打开箱门。 60℃以下才能打开箱门。

  盖好顶盖拧紧，勿使漏气； ③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置 灭菌器于火源上加热， 灭菌器于火源上加热，立式压 力锅通上电源， 力锅通上电源，并打开顶盖上 的排气阀放出冷气( 的排气阀放出冷气(水沸腾后 排气10 10～ 排气10～15min) 。 关闭排气阀， ④关闭排气阀，使蒸汽压上升到 规定要求， 规定要求，并维持规定时间 (按灭菌物品性质与有关情况 而定) 而定) 。

  关紧锅门，打开进气阀， ①关紧锅门，打开进气阀，将蒸 汽引入夹层进行预热， 汽引入夹层进行预热，夹层内冷 空气经阻气器自动排出。 空气经阻气器自动排出。 夹层达到预定温度后， ②夹层达到预定温度后，打开锅 室进气阀，将蒸汽引入锅室， 室进气阀，将蒸汽引入锅室，锅 室内冷空气经锅室阻气器自动排 出.

  达到规定时间后， ⑤达到规定时间后，对需干燥的 物品， 物品，立即打开排气阀排出蒸 待压力恢复到零时， 汽，待压力恢复到零时，自然 冷却至60℃后开盖取物， 60℃后开盖取物 冷却至60℃后开盖取物，如为 液体物品，别打开排气阀， 液体物品，别打开排气阀， 而应立即将锅去除热源， 而应立即将锅去除热源，待自 然冷却，压力恢复至零， 然冷却，压力恢复至零，温度 降到60℃以下再开盖取物， 60℃以下再开盖取物 降到60℃以下再开盖取物，以 防突然减压， 防突然减压，液体剧烈沸腾或 容器爆破。 容器爆破。

  ③待锅室达到规定的压力与温度 调节进气阀， 时，调节进气阀，保持 103.4kPa、121℃15～30min灭 103.4kPa、121℃15～30min灭 菌。 自然或人工降温至60℃ 60℃再开门 ④自然或人工降温至60℃再开门 取物， 取物，不得用快速排出蒸汽 以防突然降压， 法，以防突然降压，液体剧烈 沸腾或容器爆破。 沸腾或容器爆破。

  1﹑干热和湿热高压蒸汽锅灭菌 (1)灭菌前准备 (1)灭菌前准备 (2)装放干热灭菌器 (2)装放干热灭菌器 (3)设备检查 (3)设备检查

  (4)干热灭菌法 (4)干热灭菌法 (5)手提式高压锅或立式压力蒸汽灭 (5)手提式高压锅或立式压力蒸汽灭 菌器的使用步骤 (6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用步 (6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用步 骤 2﹑间歇灭菌方法 (1)灭菌方法 (1)灭菌方法 (2)血清凝固器使用方法 (2)血清凝固器使用方法 (3)煮沸消毒 (3)煮沸消毒 (4)灭菌后处理 (4)灭菌后处理

  一．防止试验操作中人为污染样品； 防止试验操作中人为污染样品； 二．保证工作人员安全，防止检出 保证工作人员安全， 的致病菌由于操作不当造成个人 污染。 污染。

  1.接种时必须穿工作服、戴工作帽。 1.接种时必须穿工作服、戴工作帽。 接种时必须穿工作服 2.进行接种食品样品时，必须穿专业工作服、 2.进行接种食品样品时，必须穿专业工作服、 进行接种食品样品时 帽及拖鞋，它们应放在无菌室缓处间， 帽及拖鞋，它们应放在无菌室缓处间，工作 前经紫外线消毒后使用。 前经紫外线消毒后使用。应在进无菌室前用 肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。 75%酒精棉球将手擦干净 肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。 3.进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须 3.进行接种所用的吸管、 进行接种所用的吸管 经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿， 经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不 能放置后再使用， 能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼 次后使用。 酒精点燃烧灼3 95%酒精点燃烧灼3次后使用。